新藥研發(fā)中 宿主細胞蛋白 那些事

宿主細胞是生產諸如重組蛋白、抗體和疫苗類藥物的上游材料，不同用途的藥物會采用不同的宿主細胞，重組蛋白類藥物常用的細胞有中國倉鼠卵巢細胞（CHO），新型疫苗常采用非洲綠猴腎細胞（Vero）、犬腎細胞 （MDCK）、昆蟲細胞、人二倍體細胞，傳統(tǒng)疫苗還會采用大腸桿菌、雞胚等作為宿主細胞。

宿主細胞蛋白如果殘留在藥物制劑中，會引起人體的免疫應答——過敏反應，如：發(fā)熱、水腫，甚至休克等。人體的免疫應答性質和效果，會受到HCPs的濃度、數(shù)量和個體免疫系統(tǒng)差異影響而不同。藥物監(jiān)管部門關注患者用藥的安全性，所以HCPs的監(jiān)控變得越來越重要。作為藥企來說，藥物研發(fā)周期很長，成功率也很低，投入和產出不是直接劃等號的，因此在藥品研發(fā)的中后期，藥企也會非常關注生產工藝設計過程中HCPs的控制。因為，藥物中HCPs殘留量會影響臨床試驗效果，國外曾有報道，由于藥企開發(fā)的新藥在臨床實驗中出現(xiàn)免疫反應，導致臨床實驗推遲、擱置或重新設計工藝，如：易普森公司，凝血因子9(IB1001) 臨床實驗在2012年被擱置，2017才獲批。

藥品即使被成功開發(fā)，但如果想進入不同國家的市場，還要達到當?shù)厮幬锉O(jiān)管部門的標準，所以藥企都會遵照不同國家藥典要求，嚴格建立HCP監(jiān)控體系。中華人民共和國藥典2010年版第三部就明確規(guī)定CHO細胞殘余蛋白占總蛋白含量要小于0.05%以下；對Vero細胞殘余蛋白會隨不同產品而異，ELISA方法檢測法每個劑量不高于2微克或4微克。美國FDA認為可以接受的范圍為1-100/100萬，即1-100個PPM。

當前，廣泛被使用于HCP檢測的方法是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）。在藥物研發(fā)中，通常會建立通用和專屬的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA試劑盒。到臨床實驗時，藥企會采用專屬試劑盒，即工藝特異HCP ELISA試劑盒，需要單獨純化HCP蛋白，免疫篩選抗體。

HCP ELISA的原理是先將HCP抗體包被酶標板，孵育待測樣品，通過HCP抗體捕獲和富集樣品中HCPs，再加入與包被酶標板的抗體種屬不同的，酶聯(lián)報告基團的HCP抗體，結合已被富集的HCPs，通過底物顯色或熒光的方式成像，終定量計算HCPs。

HCP ELISA的方法具有特異性強、靈敏度高、通量大和使用方便等特點，但也存在風險：

 ELISA方法能夠富集的HCPs至少要具有兩個及以上的表位。

當兩個表位被抗體結合時，不能存在空間位阻。

ELISA酶標板包被的抗體結合量低，會限制HCP檢出限。

不是所有HCPs都可以作為抗原產生抗體，因此會有“漏檢”，所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率（Coverage）。

Cygnus HCP測定法被用作行業(yè)的參考方法，或支持商業(yè)化生物制劑的制造和質量控制（QC），因此其質量聲譽享譽業(yè)界和監(jiān)管機構。

各種細胞系用于生產治療性單克隆抗體和重組蛋白，下一代重組疫苗以及用于細胞和基因療法的病毒載體。Cygnus為幾乎所有表達平臺提供HCP ELISA。BHK HCP ELISA，HEK293 HCP ELISA，PER.C6 ® HCP ELISA，非洲綠猴腎細胞HCP ELISA，將HeLa HCP ELISA，CHO HCP ELISA 3G，NS / 0 HCP ELISA，SP2 / 0 HCP ELISA，大腸桿菌HCP ELISA，巴斯德畢赤酵母HCP ELISA和其他細胞系HCP ELISA用于治療性單克隆抗體和重組蛋白生產的過程開發(fā)和終產品質量控制。

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